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當前位置:教育論文中心首頁--博士論文--丁酸鈉上調SETD-4負調控SMAD3抑制血管緊張素Ⅱ誘導的心臟纖維化作用及表觀遺傳學機制研究
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丁酸鈉上調SETD-4負調控SMAD3抑制血管緊張素Ⅱ誘導的心臟纖維化作用及表觀遺傳學機制研究
 
     論文目錄
 
英漢縮略語名詞對照第9-12頁
中文摘要第12-20頁
英文摘要第20-30頁
前言第30-35頁
第一部分 NaBu拮抗Ang Ⅱ抑制心臟纖維化及mRNA的表達譜分析第35-66頁
    1.主要材料和儀器設備第35-38頁
        1.1 主要試劑第35-36頁
        1.2 主要材料第36-37頁
            1.2.1 動物樣本第36頁
            1.2.2 引物序列第36-37頁
        1.3 主要試劑的配置第37-38頁
        1.4 主要實驗儀器第38頁
    2.實驗方法第38-48頁
        2.1 血管緊張素Ⅱ誘導的SD大鼠心臟纖維化模型建立第38-40頁
            2.1.1 動物實驗分組第38-39頁
            2.1.2 滲透性壓力緩釋膠囊填裝與植入第39-40頁
            2.1.3 大鼠血壓的檢測第40頁
            2.1.4 大鼠心臟超聲第40頁
        2.2 病理組織學檢查第40-44頁
            2.2.1 標本的處理與固定第40-41頁
            2.2.2 HE染色第41頁
            2.2.3 Masson染色第41-42頁
            2.2.4 免疫組織化學染色第42-43頁
            2.2.5 冰凍切片免疫熒光染色第43-44頁
        2.3 高通量mRNA測序(RNA-seq)第44頁
            2.3.1 心臟組織樣本第44頁
            2.3.2 測序過程第44頁
            2.3.3 數據分析第44頁
        2.4 熒光定量PCR第44-46頁
            2.4.1 RNA提取第44-45頁
            2.4.2 逆轉錄反應第45-46頁
            2.4.3 定量PCR檢測目的基因表達第46頁
        2.5 Western blot第46-48頁
            2.5.1 蛋白提取與濃度測定第46-47頁
            2.5.2 Western blot法檢測目的蛋白表達第47-48頁
    3.結果第48-62頁
        3.1 NaBu對心臟纖維化大鼠模型的作用第48-51頁
            3.1.1 NaBu對 Ang Ⅱ誘導的大鼠模型血壓及心臟功能的影響第48-51頁
            3.1.2 NaBu拮抗Ang Ⅱ誘導的大鼠心臟纖維化作用第51頁
        3.2 大鼠心臟α-SMA、Collagen I免疫組化染色結果第51-53頁
        3.3 NaBu下調SMAD3 抑制心臟纖維化不依賴于TGF-β1第53-57頁
            3.3.1 免疫印跡檢測大鼠心臟組織TGF-β1-SMAD2/3 相關蛋白表達第53-55頁
            3.3.2 免疫熒光雙標染色檢測大鼠心臟組織TGF-β1、pSMAD3、SMAD3的表達第55-57頁
        3.4 心臟纖維化心臟組織中mRNA表達譜分析第57-62頁
            3.4.1 心臟組織中mRNA表達譜分析第57-59頁
            3.4.2 大鼠心臟組織差異基因GO與 KEGG富集分析第59-60頁
            3.4.3 差異表達顯著的mRNA間相互作用預測分析第60-61頁
            3.4.4 定量PCR驗證mRNA測序結果第61-62頁
    4.討論第62-65頁
        4.1 NaBu拮抗Ang Ⅱ抑制心臟纖維化具有潛在應用價值第62-63頁
        4.2 NaBu抑制心臟纖維化與不依賴于TGF-β1 下調SMAD3 的表達相關第63-64頁
        4.3 大鼠心臟組織中mRNA的表達譜分析第64-65頁
    5.小結第65-66頁
第二部分 NaBu上調SETD4 抑制SMAD3 不依賴于TGF-β1第66-87頁
    1.主要材料和儀器設備第66-69頁
        1.1 主要試劑和材料第66-68頁
            1.1.1 小干擾RNA第66頁
            1.1.2 定量PCR引物第66-67頁
            1.1.3 主要試劑第67-68頁
        1.2 主要試劑的配置第68頁
        1.3 主要實驗儀器第68-69頁
    2.實驗方法第69-75頁
        2.1 新生SD大鼠原代心臟成纖維細胞培養與鑒定第69-70頁
            2.1.1 原代心臟成纖維細胞提取第69-70頁
            2.1.2 原代心臟成纖維細胞鑒定第70頁
        2.2 離體實驗分組第70頁
        2.3 Ang Ⅱ與 NaBu作用條件確定第70-71頁
            2.3.1 AngⅡ作用時間與濃度的確定第70-71頁
            2.3.2 NaBu作用時間與濃度確定第71頁
        2.4 小干擾RNA(siRNA)干擾SETD4 表達第71-72頁
            2.4.1 siRNA合成第71頁
            2.4.2 細胞轉染第71-72頁
        2.5 RT-qPCR第72頁
        2.6 EdU法檢測細胞增殖第72-73頁
        2.7 細胞免疫熒光染色第73-74頁
        2.8 Western Blot檢測SMAD3 信號通路及纖維化相關指標第74-75頁
            2.8.1 細胞總蛋白提取第74頁
            2.8.2 BCA法檢測蛋白濃度第74頁
            2.8.3 Western Blot檢測目的蛋白表達量第74-75頁
    3.結果第75-84頁
        3.1 心臟成纖維細胞的鑒定第75-76頁
        3.2 Ang Ⅱ及 NaBu的濃度/時間梯度第76-78頁
        3.3 NaBu下調SMAD3不依賴于TGF-β1與上調SETD4相關第78-81頁
            3.3.1 NaBu拮抗Ang Ⅱ下調SMAD3 抑制α-SMA的表達第78-80頁
            3.3.2 NaBu上調SETD4 拮抗Ang Ⅱ下調SMAD3 的表達不依賴于TGF-β1第80-81頁
        3.4 NaBu通過上調SETD4 抑制SMAD3 表達抑制心臟成纖維細胞增殖和遷移第81-84頁
            3.4.1 SETD4干擾效率檢測第81-82頁
            3.4.2 干擾SETD4對CFs生長的影響第82頁
            3.4.3 干擾SETD4后NaBu拮抗Ang Ⅱ對 CFs增殖的影響第82-83頁
            3.4.4 干擾SETD4后NaBu拮抗Ang Ⅱ對 CFs遷移運動能力的影響第83-84頁
    4.討論第84-85頁
    5.小結第85-87頁
第三部分 NaBu上調SETD4 結合YY1 負調控SMAD3 的表觀遺傳調控的分子機制第87-116頁
    1.主要材料和儀器設備第87-90頁
        1.1 實驗材料第87-88頁
            1.1.1 細胞第87頁
            1.1.2 siRNA和質粒第87-88頁
            1.1.3 PCR引物第88頁
        1.2 主要試劑第88-89頁
        1.3 主要儀器第89頁
        1.4 主要試劑配制第89-90頁
    2.實驗方法第90-100頁
        2.1 細胞培養第90頁
        2.2 干擾RNA和質粒轉染第90頁
        2.3 細胞RNA熒光原位雜交技術(FISH)第90-92頁
        2.4 定量PCR第92頁
        2.5 Western blot第92頁
        2.6 SMAD3啟動子報告基因載體構建第92-95頁
        2.7 熒光素酶報告基因檢測第95-96頁
        2.8 過表達質粒載體轉染第96頁
        2.9 Co-IP實驗第96-97頁
        2.10 染色質免疫沉淀技術(ChIP)第97-100頁
        2.11 統計學分析第100頁
    3.結果第100-112頁
        3.1 SETD4在心臟成纖維細胞中的細胞定位第100-101頁
        3.2 NaBu上調SETD4 結合YY1經H3K9me3 抑制SMAD3 基因啟動子區的轉錄活性第101-106頁
            3.2.1 NaBu經 H3K9me3 負調控SMAD3 基因表達第101-103頁
            3.2.2 NaBu上調SETD4經H3K9me3負調控SMAD3基因表達與反式作用因子YY1密切相關第103-104頁
            3.2.3 NaBu上調SETD4和YY1對SMAD3 啟動子區轉錄活性的影響第104-105頁
            3.2.4 NaBu通過YY1和H3K9me3 負調控SMAD3 基因的表達第105-106頁
        3.3 NaBu上調的SETD4與YY1 相互結合在表觀遺傳水平抑制SMAD3基因的轉錄第106-109頁
            3.3.1 SETD4與YY1 能夠相互結合第106-107頁
            3.3.2 SETD4與YY1 能夠相互結合在表觀水平抑制SMAD3 的表達第107-108頁
            3.3.3 SETD4與YY1 結合經H3K9me3 在表觀水平抑制SMAD3 的表達第108-109頁
        3.4 NaBu上調SETD4 負調控SMAD3 直接影響CFs中下游功能分子CTGF和 Collagen Ⅲ的表達第109-112頁
    4.討論第112-114頁
        4.1 SETD4的作用機制依賴于其細胞定位第112頁
        4.2 NaBu上調SETD4 調控SMAD3 基因表達的分子機制第112-114頁
    5.小結第114-116頁
全文總結第116-119頁
參考文獻第119-126頁
博士期間其它研究工作第126-133頁
文獻綜述第133-145頁
    參考文獻第139-145頁
致謝第145-146頁
攻讀學位期間的研究成果及發表的學術論文第146頁

 
 
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